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色譜法用于分離和提純對固定相吸附力不同的物質(zhì)。
在色譜法中,靜止不動的一相(固體或液體)稱為固定相 ;運(yùn)動的一相(一般是氣體或液體)稱為流動相。
柱色譜為向玻璃管中填入固定相,以流動相溶劑浸潤后在上方倒入待分離的溶液,再滴加流動相,因?yàn)榇蛛x物質(zhì)對固定相的吸附力不同,吸附力大的固著不動或移動緩慢,吸附力小的被流動相溶劑洗下來隨流動相向下流動,從而實(shí)現(xiàn)分離。
紙色譜以濾紙條為固定相,在紙條上點(diǎn)上待分離的混合溶液的樣點(diǎn),將紙條下端浸入流動相溶劑中懸掛,溶劑因?yàn)槊?xì)作用沿濾紙條上升,樣點(diǎn)中的溶質(zhì)從而被分離。
薄層色譜是在玻璃板上涂以固定相涂層,然后點(diǎn)樣,下端浸入溶劑,同樣自下而上分離。常用于探索柱色譜實(shí)驗(yàn)條件,溶劑和固定相的選擇等。
常用固定相有石膏、氧化鋁、蔗糖、淀粉等,常用流動相為水、苯等各種有機(jī)溶劑。
液相色譜法是繼氣相色譜之后,70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術(shù)。
液相色譜是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的?,F(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別。不同點(diǎn)僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率 和實(shí)現(xiàn)了自動化 操作。經(jīng)典的液相色譜法,流動相在常壓下輸送,所用的固定相柱效低,分析周期長。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論,流動相改為高壓輸送(zui高輸送壓力可達(dá)4.9?107pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜。